Диагностика Хламидиоза: виды и особенности

Хламидиоз привлекает к себе особо пристальное внимание со стороны гинекологов, так как это заболевание связано со значительным числом акушерских и перинатальных осложнений. По своей сути хламидиоз является очень «коварной» болезнью, так как может протекать бессимптомно или маскироваться под другие женские заболевания. Поэтому его выявление возможно только лабораторными методами.

Лабораторные методы диагностики хламидийной инфекции

Диагностика хламидиоза у женщин выявляет заболевание чаще, так как их организм является более благоприятной средой для размножения хламидий, чем у мужчин. В обследовании на хламидии в первую очередь нуждаются женщины с воспалительными заболеваниями гениталий, бесплодием.

Анализ мочиО вероятном заражении хламидиями чаще всего становится известно совершенно случайно, при сдаче анализов во время профосмотра или при плановом визите к гинекологу. При возникших подозрениях врач может назначить сдачу следующих материалов для исследований:

  • кровь;
  • мочу;
  • мазок из влагалища, шейки матки и уретры.

Хламидии диагностируются лабораторно, но также можно определить их наличие самостоятельно, в домашних условиях с помощью экспресс-тестирования. Рассмотрим подробно, какие методики существуют.

к оглавлению ↑

ПЦР

За уникальность изобретенной методики в 1983 году американский ученый Кэри Мюллис был удостоен Нобелевской премии. По сегодняшний день она является точнейшей при диагностировании инфекционных заболеваний (до 100% точности).

Полимеразная цепная реакция — способ, основанный на увеличении малого содержания инородных молекул ДНК в биологическом образце.

Его задача состоит в многократном удвоении интересующего участка ДНК путем добавления воздействующих ферментов. Результат – вырабатывается достаточное количество исследуемых частиц для их визуального выявления. Специфика процедуры в том, что размножаются клетки только тех видов микроорганизмы, которые необходимо найти. Если их нет – состав анализа останется первоначальным, что будет свидетельствовать об отсутствии болезни у обследуемого.

ПЦРКроме амплификации (увеличение числа копий ДНК) ПЦР позволяет обнаружить наследственные инфекционные заболевания, изучить структуру ДНК при врожденных или приобретенных генетических заболеваниях. Это помогает произвести правильную диагностику и подобрать соответствующее лечение. ПЦР – «золотой стандарт» молекулярного поиска опасных микроорганизмов.

Широкое распространение она получила благодаря возможности находить наличие микроорганизма даже при его незначительном содержании в образце. С помощью ПЦР также диагностируются временно неактивные возбудители (в том числе хламидиоза), не прибегая к долгим микробиологическим исследованиям. Поэтому она распространена в урологии, гинекологии, при определении урогенитальных заболеваний, передающихся половым путем (ВИЧ, гепатиты, прочие). По этой технологии выявляются вирусы с антигенной нестабильностью.

ДНКПринцип проведения ПЦР следующий: за образец берется носитель дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). У человека последовательность ее цепочки составляют 4 нуклеотида, которые соединяются между собой по принципу: аденин и тимидин, гуанин и цитозин. Для каждого микроорганизма характерны свои цепочки ДНК – они имеют определенную последовательность набора элементов.

В лабораториях существуют катализаторы развития определенных болезнетворных форм. В случае хламидиоза, при добавлении на пробник они вызывают ускоренное размножение хламидий, клетки которых находятся в образце. Раз в 3 минуты катализатор вводится в клеточную среду. В результате хламидии распространяется в ней в геометрической прогрессии. Это дает возможность вычислить у клеток ДНК «чужую последовательность цепочек». По ее структуре определяется конкретный микроорганизм.

Плюсы метода:

  • выявляемость при минимальной концентрации болезнетворных форм в исследуемом материале;
  • быстрота заключения исследования (в течение нескольких часов).

ПЦРСпецифичность ПЦР заключается в создании комплементарных (с появлением взаимно соответствующих молекул) наборов между матрицей и синтетическими олигонуклеотидами (секторами ДНК) длинной 18-30 нуклеотидов. Каждый из них соответствует одной из цепей матрицы, выделяя начало и конец восприимчивого участка. После гибридизации матрицы и ферментного вещества происходит размножение микробных цепочек ДНК в питательной среде. Для проведения ПЦР производится 20-35 циклов.

Каждый проходит 3 основные стадии:

  1. Двухцепочечная ДНК-матрица прогревается до 94-96°C на 1-2 мин для расхождения цепочек ДНК (до 98°C при использовании термостабильной полимеразы). Происходит денатурация — разрыв водородных соединений двух связанных цепей.

    ПЦРОдновременно температуру понижают – получившиеся однонитевые ДНК (праймеры) из тестируемой материи соединяются с аналогичными структурами матрицы. То есть происходит отжиг. Его температура определяется спецификой праймеров (она меньше на 4-5°С от температуры плавления нитевых структур).

  2. Производится элонгация – ДНК-полимераза копирует матричную цепь с использованием праймера как затравки. Касаемо хламидийной ДНК – процесс протекает при температуре 72°C. Вторая стадия длится около 15 минут.
  3. Полученная матрица отправляется на повторный цикл.

По такой же системе проводится анализ рибонуклеиновых кислот. Благодаря этому можно обнаружить вредоносные тельца, которые в качестве хранения генетической информации используют только РНК.

к оглавлению ↑

РИФ (реакция иммунофлюоресценции)

Реакция Кунса – метод быстрого диагностирования для обнаружения микробных антигенов, выявления антител. В некоторой литературе он называется МФА – метод флуоресцирующих антител. По характеру проведения подразделяется:

  1. РИФПрямой способ – образец анализа обрабатывается иммунной сывороткой с флуорохромированными антителами, которые отражают свет при включенной ультрафиолетовой подсветке микроскопа. Микроорганизмы при взаимодействии с антителами по контуру клетки приобретают зеленоватое свечение.
  2. Непрямой способ – выявляется комплекс антител антиглобулиновой сывороткой, разбавленной с флуорохромом. На мазки с микробами наносится бактерицидная кроличья сыворотка с антителами. Через некоторое время антитела, не вступившие с вирусом во взаимодействие, отмывают.

    Процедуру повторяют еще раз. В конечном итоге при рассмотрении в ультрафиолете видны 2 группы: микробы и кроличьи антитела с характерным свечением. Для проведения анализа возможно применение других антиглобулиновых сывороток, в качестве продуцентов могут быть использованы бараны, козлы, лошади, морские свинки.

  3. РИФФлуорохромирование – это обработка исследуемого материала определенным красителем для увеличения контрастности и интенсивности их высвечивания. В медицине пользуются акридиновым оранжевым флуорохромом, так как он вызывает полихроматическое свечение нуклеиновых кислот. При обработке им препаратов, ДНК отчетливо флуоресцирует зеленым, РНК – красным.

Эта методика позволяет лаборантам отслеживать наличие хламидиозного заболевания. Она дает возможность проанализировать этапы развития микроорганизмов.

к оглавлению ↑

Бакпосев (культуральный метод)

Лабораторная диагностика хламидиоза с помощью бакпосева – самый долгий и затратный процесс, по сравнению с другими методами. Несмотря на то, что он составляет порядка 2-4 дней, результаты верны на 70-90%. Для бакпосева у пациента собирается моча, так как она содержит наибольшее количество микроорганизмов, обитающих в организме.

БакпосевСобранный материал помещают в специальную питательную среду. В течение нескольких дней микроорганизмы активно питаются в ней и создают своих клонов. После производится изучение переработанной среды и определение типа «вскормленных» бактерий. Главный плюс анализа: он позволяет определить перечень антибиотиков, которые станут губительны для хламидий.

Распространение внутри организма человека бактерий означает, что они приспособились к иммунным механизмам и, игнорируя их, развиваются дальше. Химия иммунитета у каждого человека особая – она зависит от многих показателей: кислотно-щелочной баланс, процент глюкозы в крови, содержание солей, уровень метаболизма и т.д. Поэтому лечение должно подбираться индивидуально. Посев позволяет не только выбрать правильную группу антибиотиков, но и осуществить точный подбор препаратов для конкретного взятого человека.

к оглавлению ↑

ИФА (иммунноферментный анализ)

ИФА позволяет находить специфические антитела, которые являются защитными механизмами крови к тем или иным болезнетворным агентам (антигенам). В данном случае, этот анализ рассчитан на обнаружение хламидийных антител (в крови или вагинальном мазке), которые формируются организмом в ответ на инфицирование.

Принцип анализа ИФА

Принцип анализа ИФА

Антитела выявляются по ходу реакции с препаратами, направленными на усиление защитного механизма. Процесс реакции контролируется, на основании его ставится диагноз. Иммуноглобулины появляются в результате сложных нейрогуморальных процессов в иммунитете зараженного, возникающих в качестве ответной реакции на появление инородных антигенов.

Виды изученных иммуноглобулинов:

  1. IgA – защищают слизистые оболочки органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы от бактериального воздействия. При остром течение заболевания не выявляются. Появляются примерно спустя неделю от начала заболевания или позже.

    ИФА80% молекул иммуноглобулина А накапливаются в слизистых, остальные содержатся в крови. По окончанию периода обострения их численность снижается и исчезает полностью спустя 8 недель с момента выздоровления. Если при повторном обследовании IgA обнаруживают позже этого срока, то их наличие свидетельствует о хроническом течение болезни.

  2. IgM – являются основными маркерами острого развития заболевания. Проявляются на 5-й день после заражения и сохраняются до 6 недель. В дальнейшем они быстро нейтрализуются иммунной системой.
  3. IgG – остаточный «контраргумент» иммунитета. Появляются спустя 4-5 недель после заболевания, предотвращают рецидив, усиливают сопротивляемость при повторном инфицировании. Со временем полностью не исчезают, сохраняя «молекулярную формулу» борьбы с определенным возбудителем на случай повторного попадания его в организм. Повышение концентрации этих иммуноглобулинов свидетельствует о повторном заболевании.
  4. ИФАIgD – находятся на B-лимфоцитах, у здорового человека они содержаться в малом количестве. К 10-му году жизни формируется точное количество телец для IgD. Их количество возрастает при беременности, у людей с системным инфицированием соединительных тканей, при бронхиальной астме, некоторых аутоиммунных заболеваниях и иммунодефиците.
  5. IgE – их наличие указывает на сенсибилизацию организма в результате аллергических заболеваний, гельминтозов или аутоиммунных заболеваний.

Для отдельного типа болезнетворного агента существуют свои специфические антитела. Они скрепляются с патологическими микроорганизмами или антигенами, образуя клетку «антиген-антитело» с дальнейшим их изолированием, нейтрализацией и выводом за пределы организма. Вид возбудителя или тип вредного вещества, содержащегося в организме больного, определяется именно по наличию таких образований.

ИФА незаменим при комплексном диагностировании заболевания. При позднем выявлении недуга данный способ позволяет определить стадию прогрессии – острая или хроническая.

ИФА также проводят при артритах, пневмонии, поражениях глаз, чтобы исключить или подтвердить хламидийное присутствие. Недостаток метода: отсутствие возможности выявить факт заболевания на начальной стадии, так как в момент инкубационного периода (10-20 дней) антитела не вырабатываются. В связи с этим точность результата составляет не более 60%.

к оглавлению ↑

Общий мазок

Для проверки у женщин берется мазок из влагалища, шейки матки и уретры. После этого собранный материал исследуется под микроскопом. Преимущества: высокая скорость проверки, широкая доступность, низкая стоимость (во многих поликлиниках он бесплатный). Недостаток: низкий процент выявления хламидий (15-20%).

Данный способ носит рекомендательный характер. Он позволяет выявить подозрения на инфицирование по содержанию в пробах лейкоцитов и может служить поводом для более детального обследования.

к оглавлению ↑

Экспресс-тестирование

В аптеках в свободном доступе можно приобрести наборы быстрой проверки на хламидиоз (экспресс или мини тесты разных фармацевтических компаний). Самостоятельное тестирование не является клиническим исследованием, но служит дополнительным поводом для обращения за медицинской помощью. Результаты экспресс-тестов не учитываются врачом при приеме пациента, так как они не способны предоставить всех необходимых данных для назначения правильного лечения!

Экспресс-тестированиеПринцип работы всех тестов построен на методе иммунной хроматографии: на полоску, чувствительную к инфекции, наносится среда возбудителя (кровь, моча, слизистые выделения). Происходит биологическое и химическое взаимодействие, в результате чего полоска окрашивается. Во всех современных тестах применяется принцип двухполосной индикации. Окрашивание обеих индикаторов – причина для беспокойства.

Преимущества метода: широкое распространение, низкая цена, быстрый результат. Главный минус – небольшая точность выявляемости, всего лишь 20-50%. К применению экспресс-тестирования чаще прибегают люди, которые подозревают у себя хламидиоз (из-за незащищенного полового контакта, попадания крови или слюны зараженного на открытую рану и т.д.).

Для более достоверной предварительной информированности можно воспользоваться «правилом трехногого табурета», пройдя сразу 3 теста от разных производителей. Даже если только один дал положительные показатели – это неоспоримый повод обратиться за профессиональной диагностикой.

Тест на хламидиозПеречисленные типы исследований при подозрениях на хламидиоз могут применяться параллельно, например: ПЦР и РИФ, РИФ и ИФА. Каждое имеет свои пробелы, поэтому диагностика хламидийной инфекции сразу по нескольким методам позволяет их перекрывать.

Совокупность таких мер приводит к получению точного диагноза. На основании полученного набора данных и индивидуальных особенностей пациента производится подбор требуемых антибиотиков.

Рекомендуем прочитать:
Якутина Светлана
Якутина Светлана
Эксперт проекта Ginekologii.ru
Статья помогла вам?
Дайте нам об этом знать - поставьте оценку
1 Star2 Stars3 Stars4 Stars5 Stars (No Ratings Yet)
Загрузка...

Обсуждение закрыто.